Στις 28 Νοεμβρίου 1965 ο Πανσερραϊκός έδωσε τον πρώτο του αγώνα στην Α’ Εθνική και επικράτησε με 1-0 της Νίκης Βόλου στην έδρα του χάρη σε γκολ του Τσακίρη. Εκείνη την ημέρα πήρε το “βάπτισμα του πυρός” στη μεγάλη κατηγορία και πλέον διανύει την 25η σεζόν του στο πρωτάθλημα.
Η αναμέτρηση του Σαββάτου 25 Νοεμβρίου με τον ΠΑΟΚ στην Τούμπα ήταν η 800η στην ιστορία του και έχει σημειώσει 207 νίκες – 211 ισοπαλίες και 382 ήττες. Σε αυτές τις αναμετρήσεις έχουν σημειωθεί 1810 τέρματα, με την ομάδα των Σερρών να έχει σκοράρει 703 φορές και 1107 οι αντίπαλοί της. Οι 798 αγώνες είναι για την κανονική διάρκεια του πρωταθλήματος, ενώ έχει και δύο αγώνες κατάταξης την σεζόν 1965-66.
Τα περισσότερα παιχνίδια στην κατηγορία με τα χρώματα του Πανσερραϊκού έχει ο Δημήτρης Ηλιάδης, ο οποίος αγωνίστηκε από την παρθενική συμμετοχή της ομάδας στη μεγάλη κατηγορία μέχρι και το 1975-76 και είχε συνολικά 257 παρουσίες.
Ο Γιώργος Μπιτζίδης με 48 γκολ είναι ο κορυφαίος σκόρερ της ομάδας των Σερρών σε επίπεδο Α’ Εθνικής, ενώ ο Βλαντιμίρ Ταμπόρσκι είναι ο προπονητής που έχει τα περισσότερα παιχνίδια στην τεχνική ηγεσία του Πανσερραϊκού στην κατηγορία, αφού κάθισε 112 φορές στον πάγκο για το πρωτάθλημα.